基于微流控芯片的肿瘤细胞无标记分选与分析技术系统,围绕循环肿瘤细胞(CTCs)的高效、高纯度、高通量分离及无损分析需求,通过多学科交叉创新,构建了一套完整的从细胞分选到精准分析的解决方案。该系统以CTCs与血细胞间的物理特性差异(如尺寸、刚度)为分离依据,避免了传统生物标记方法的高成本、操作复杂及对细胞活性的影响,展现了显著的技术创新性和应用潜力。系统的核心创新始于对确定性侧向位移(DLD)分选技术的微结构优化。传统DLD芯片采用圆形微柱,其临界尺寸较大,易堵塞且通量受限。本研究突破经验化设计模式,通过贝塞尔曲线拟合构建参数化模型,以降低第一流束宽度为目标优化流场,首创了“液滴形”微柱形貌。该形貌相比圆形微柱临界尺寸降低21.25±1.91%,通量提升28%,且比三角形微柱流体引导更顺畅、细胞友好性更佳。这种基于流场调控的形貌优化方法,为微流控器件的理性设计提供了新范式。
在此基础上,系统创新性地设计了两级阵列DLD芯片,其第一级和第二级临界尺寸分别设定为8μm和13μm,巧妙应对了CTCs的尺寸异质性(4-30μm)与白细胞(5-20μm)的尺寸重叠难题。该芯片结构简单,重复性高,实验表明其对CTCs的分选纯度高达98.25±2.48%,回收效率达96.30±2.10%,通量可达2mL/min,实现了稀有细胞的高性能无标记分选。针对两级分选后中间出口仍存在的尺寸接近细胞混合问题,系统提出了另一项核心创新:基于刚度差异的控制流体流速无标记精确分选理论。通过3D固体力学接触仿真与流体力学仿真耦合分析,首次解析了细胞穿过锥形通道时临界入口流率与细胞尺寸、杨氏模量的定量关系。据此理论开发的锥形通道芯片,在35μL/min通量下,成功将癌细胞纯度从9.3%提升至16.67%(提升约1.8倍),回收效率为75%,实现了对DLD等传统尺寸分选技术无效区域的精确补充筛选。
最终,系统通过集成模块化设计,将高通量两级阵列DLD分选子系统、锥形通道精筛模块与拉曼显微光谱分析子系统无缝对接。特别开发的玻璃-打孔PDMS-玻璃聚焦芯片,有效避免了常用材料PDMS对拉曼信号的干扰,确保了分析的高精度。该系统实现了全流程无标记操作,完成了从临床量级血样中CTCs的高效富集、高纯度分离到无损伤、高精度化学成像分析的全链条操作,并初步探索了单细胞封装芯片用于下游单细胞测序的潜力,展现出强大的临床应用前景。总之,本技术系统通过微结构创新、多物理场耦合理论突破及系统集成,解决了CTCs无标记分选分析中的多个关键瓶颈问题,为癌症的液体活检提供了一种高性能、完整且实用的技术平台。